Anticorps antinucléaires

Plan

Généralités

Immunofluorescence indirecte : généralités et apport au clinicien

description
indication clinique

Immunofluorescence sur cellules Hep2

aspects de le fluorescence
orientation clinique

Anticorps antinucléaires

Fluorescence homogène
Cas particulier des anticorps anti DNA natif
Fluorescence membranaire
Fluorescence mouchetés
Fluorescence nucléolaire
Anticorps antinucléaires "solubles" ou ENA
Fluorescence mitotique

Anticorps anticytoplasmiques

Généralités

Les anticorps anti-nucléaires (ANA pour antinuclear antibodies) sont des auto-anticorps dirigés contre des constituants du noyau.

Le lupus érythémateux systémique est l'archétype de maladie auto-immune où sont détectés les ANA. Cependant, les ANA sont présents dans de nombreuses autres maladies

La détection et la caractérisation des ANA sont une étape déterminante devant toute manifestation clinique évoquant une maladie auto-immune. Mais elle nécessite une stratégie qui comprend :

une étape de dépistage qui fait appel à l'immunofluorescence indirecte
l'identification du ou des ANA détectés qui fait appel à diverses techniques (Outcherlony, ELISA, immunodot, Western blot, ...) fonction de l'anticorps suspectés.

Notons que certains anticorps dirigés contre des constituants cytoplasmiques sont dépistés par les mêmes techniques que les anticorps anti-nucléaires (immunoflorescence indirecte sur culture cellulaire Hep2) et par abus de language sont souvent appelés ANA.

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Immunofluorescence indirecte : généralités et apport au clinicien

Deux techniques sont utilisées

Immunofluorescence indirecte

sur foie (ici de rat)

Méthode globale de dépistage très sensible (95 %),
aujourd'hui rendue désuète devant son manque de spécificité et la généralisation des cultures cellulaires.

Immunofluorescence sur culture cellulaire,

méthode de référence actuellement.

Les cellules Hep2, issues de la culture de cellules tumorales d'origine humaine (carcinome laryngé), ont pour avantage :

de posséder des noyaux proéminents, rendant plus aisée la détection et l'analyse des anticorps antinucléaires
de permettre, grâce à la présence de nombreuses cellules en cours de division, la mise en évidence des auto-anticorps dirigés contre des structures mitotiques

La recherche d'anticorps se fait par dilutions successives du sérum du patient et par adjonction d'un sérum fluorescent qui se fixe sur les anticorps. Plus la dilution est importante, moins la fluorescence est marquée pour disparaître au-delà d'une dilution seuil, qui fournit le résultat (qui est donc exprimé en dilution : 1/80; 1/160; 1/320 ...).

Une difficulté est la présence d'ANA dans 20% environ de la population. Ces ANA, non pathogènes, sont à taux faibles ou moyens. La prévalence d'ANA chez le sujet sain augmente avec l'âge.

Taux > 1/40 : 20-30%
Taux > 1/80 : 10-12%
Taux > 1/160 : 5%
Taux > 1/320 : 3%

Il est donc important de bien peser l'indication de la recherche d'ANA, en fonction du contexte clinique.

Contexte clinique	Fréquence de la positivité des ANA
Maladies où la détection des ANA est très utile pour le diagnostic
Lupus érythémateux systémique (LES) Syndrôme de Sjögren Sclérodermie systémique	95-100% 40-70% 60-80%
Maladies où la détection des ANA est utile pour le pronostic ou le suivi évolutif
Myopathies inflammatoires chroniques (dermato- et polymyosite) Arthrite chronique juvénile Syndrome de Raynaud	30-80% 20-50% 20-60%
Circonstances où la détection d'anticorps est un critère diagnostique
Lupus induit Hépatite auto-immune MCTD*	100% 100% 100%
Maladies où il est inutile de dépister des ANA
Polyarthrite rhumatoïde (sauf diagnostic avec LES) Sclérose en plaques Purpura thrombopénique idiopathique Maladies de la thyroïde Lupus discoïde Maladies infectieuses Cancers Patients ayant des implants en silicone Fibromyalgie Parents de patients ayant un LES ou une sclérodermie	30-50% 25% 10-30% 30-50% 5-25% variable variable 15-25% 15-25% 5-25%

*MCTD : Mixed Connectice Tissue Disease ou syndrome de Sharp

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L'immunofluorescence indirecte sur cellules Hep2

Aspects de la fluorescence

On décrit trois aspects de fluorescence nucléaire (détectant donc des anticorps antinucléaires) :

homogène,
moucheté,
nucléolaire,

Il existe un quatrième type de fluorescence : fluorescence cytoplasmique correspondant à des anticorps anticytoplasmiques.

L'aspect est souvent évocateur d'un type d'anticorps.

Fluorescence nucléaire

Aspect homogène

Fluorescence nucléaire

Aspect moucheté

Fluorescence nucléolaire

Fluorescence cytoplasmique

Notons qu'il n'est pas rare d'observer des aspects mixtes mêlant plusieurs types de fluorescence


Fluorescence mixte nucléaire homogène et nucléolaire	Fluorescence nucléaire mixte mouchetée et nucléolaire

L'aspect de la fluorescence permet d'orienter le diagnostic, car évoque un ou plusieurs antigènes cibles et une ou plusieurs pathologies associées

Aspect en fluorescence	Antigène cible	Pathologies associées
Fluorescence nucléaire
Homogène	dsDNA Histone	Lupus érythémateux systémique (95%) Lupus discoïde Polyarthrite rhumatoïde Hépatite auto-immune Lupus érythémateux systémique Lupus induit
Nucléolaire	Pm/Scl	Sclérodermie systémqie (30%) Polymyosite Sclerodermie Syndrome de chevauchement Hypertension artérielle pulmonaire
Matrice nucléaire	hRNP	MCTD* Lupus érythémateux systémique
Finement granulaire	SSA SSB	Lupus érythémateux systémique (45%) Syndrome de Sjögren (95%) Sclérodermie (5%)
Moucheté (gros grains)	snRNP	Lupus érythémateux systémique Syndrome de chevauchement
Centromère	CENT A-E	CREST/ Sclérodermie limitée
Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA)	Cycline	Lupus érythémateux systémique (2-3%, souvent associé à une atteinte rénale)
Taches nucléaires	p80 coiline	maladies auto-immunes et virales
Fluorescence cytoplasmique
Finement granulaire	Jo1	Polymyosite (20-40%)
Ribosome	Ribosome P	Lupus érythémateux systémique (10-15%)
Mitochondrial	M2 (pyruvate deshydrogenase)	Cirrhose biliare primitive (90%) Sclérodermie (40%)
Reticulum endothélial	cytochrome P450	Hépatite médicamenteuse
Golgi	variés	Lupus érythémateux systémique (rare) Syndrome de Sjögren
Cytokeratine	Cytokeratine	Polyarthrite rhumatoïde (30-80%) MCTD* Hépatite auto-immune Maladie de Crohn Cancer du poumon

*MCTD : Mixed Connectice Tissue Disease ou syndrome de Sharp

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Anticorps antinucléaires

Fluorescence homogène

Type d'auto-anticorps

anti-DNA, anti-DNA double brin,
anti-histones (H1, H2 A, H2 B, H3, H4)
anti-DNP (complexe DNA-histone)
anti divers antigènes chromatiniens

Pathologie

Lupus érythémateux systémique (anti-DNA, anti-histones)
Lupus induits (anti-histones)
Polyarthrite rhumatoïde (anti-histones)

Typage nécessaire des anticorps par autre technique

Fluorescence homogène à renforcement périnucléaire

Type d'auto-anticorps

anti-DNA, anti-DNA double brin,
anti-histones (H1, H2 A, H2 B, H3, H4)

Pathologie

Lupus érythémateux systémique (anti-DNA, anti-histones)
Lupus induits (anti-histones)

Ne pas confondre avec la fluorescence périnucléaire de type membranaire

Cas particulier des anticorps anti DNA natif (double brin)

Dans un contexte compatible avec un lupus érythémateux systémique, et lorsque est retrouvée une fluorescence homogène avec ou sans renforcement périnucléaire, il est important de rechercher les anticorps anti-ADN natif (ou double brin).

Trois méthodes sont utilisées.

L'immunofluorescence indirecte sur Crithidia luciliae (image)

Crithidia luciliae est un parasite hémoflagellé qui possède un ADN mitochondrial circulaire. Utilisé en routine, ce test est moins sensible que le test de Farr mais sa spécificité est comparable.

Le test de Farr

Il s'agit d'un test radioimmunologique.

L'ELISA

Ce test est plus sensible mais moins spécifique que le test de Farr.

Le double dépistage des anticorps anti-ADNn par méthode ELISA et par immunofluorescence sur Crithidia luciliae permet d'obtenir des résultats aussi fiables que le test de Farr.

Dans les quelques cas où ces deux tests divergent, une confirmation par le test de Farr est nécessaire.

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Fluorescence membranaire

Type d'auto-anticorps

anti-lamines A, B1, B2 et C (protéines fibrillaires de la membrane nucléaire)

Pathologie

Lupus érythémateux systémique
Sclérodermie
Polyarthrite rhumatoïde
Hépatite
Thrombopénie

Ne pas confondre avec la fluorescence homogène à renforcement périnucléaire

Anti - pore de la membrane nucléaire

Type d'auto-anticorps

gp210, nucleoporin p62

Pathologie

Polymyosite
Cirrhose biliaire primitive

Anti - matrice nucléaire

Type d'auto-anticorps

ribonucleoprotéines hétérogènes (hnRNP)

Pathologie

Lupus érythémateux systémique
Sclérodermie
Polyarthrite rhumatoïde
Syndrome de chevauchement (MCTD : "mixed connective tisue disease")

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Fluorescence mouchetée

A gros grains

Type d'auto-anticorps

anti-Sm (complexes RNP U1, U2, U4, U5 )
anti-U1-U2-U4/6 snRNP ("nuclear ribonucleoprotein" = RNP)

Pathologies asociées

Anti Sm :
- Lupus érythémateux systémique (5 à 30%)
Anti-U1-snRNP
- Lupus érythémateux systémique (15 à 40%)
- Syndrome de chevauchement (MCTD : "mixed connective tisue disease") (95-100%)
Anti-U2-snRNP
- Lupus érythémateux systémique
- MCTD
- Raynaud
- Psoriasis
Anti-U4/6-snRNP

Syndrome de Sjögren
Sclerodermie

A grains fins

Type d'auto-anticorps

anti SSA (= anti Ro)

Pathologie

Syndrome de Sjögren
Lupus néonatal
Bloc auriculo-vetriculaire congénital
autres

Type d'auto-anticorps

anti SSB (= anti Ro)

Pathologie

Syndrome de Sjögren
Lupus érythémateux disséminé
hépatite chronique active

Type d'auto-anticorps

anti Scl70 (topoisomérase I)

Pathologie

Sclérodermie

Type d'auto-anticorps

anti Mi2

Pathologie

Dermatomyosite

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Fluorescence nucléolaire


Nucléolaire homogène	Nucléolaire en mottes	Nucléolaire en grains
Pm SCl	U3 - RNP (fibrillarine)	RNA polymerase I
Polymyosite Sclérodermie Syndrome de chevauchement	Sclérodermie systémique	Sclérodermie systémique

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Anticorps antinucléaires "solubles" ou ENA ("extractible nuclear antigens")

Parmi les ANA précités, on distingue les ANA dits "solubles" ou ENA, dont la fluorescence sur cellules Hep2 et généralement de type "moucheté" (fluorescence granulaire plus ou moins denses et à grains plus ou moins épais.

Le terme d'antigènes nucléaires solubles (ou ENA pour "extractible nuclear antigens") a été initialement utilisé pour désigner les protéines et nucléoprotéines nucléaires solubles en tampon phosphate.

Les techniques habituellement utilisées pour typer les anti-ENA sont l'immunodiffusion double d'Ouchterlony et les techniques immunoenzymatiques (ELISA et immunoblot).

Leur présence est liée plus ou moins étroitement aux pathologies citées dans le tableau ci-dessous

Principaux autoanticorps anti-antigènes nucléaires solubles

ANTICORPS	ANTIGENES	MALADIES ASSOCIEES
anti-RNP	U1 snRNP	Connectivite mixte LED Sclérodermie
anti-Sm	U(l-6) snRNP	LED
anti-SS-A (Ro)	Ro et ARN YC1-5)	Gougerot-Sjögren LED
anti-SS-B (La)	La, ARN produits par l'ARN polymérase III	Gougerot-Sjögren LED
anti-PCNA	Protéine auxiliaire d'une ADN polymérase	LED
anti-Scl-70	Topoisomérase I	Sclérodermie
anti-Jo1	Histidyl-tRNA transférase	Polymyosite
anti-Pm/Scl	Nucléolaire	Polymyosite Sclérodermie